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martedì 28 luglio 2015

FBI DNA e COMPITI A CASA: studenti italiani RIMANDATI A SETTEMBRE?


100_6030.JPG100_6028.JPG LE SCRITTE IN INGLESE  IL LOGO  E LE TABELLE IN b/n  SONO  TRATTI  DAL SITO DELL'FBI  A CUI POTRETE ACCEDERE DA QUESTO LINK  o man mano agli altri link riportati in  seguito


LE TABELLE A DESTRA, VARIAMENTE COLORATE, SONO mie correlazioni  secondo il database degli articoli su Yara Gambirasio  che potrete trovare a questo link 

La prima cosa da ficcarsi bene in mente è che la questione del DNA è un immenso "business" (e forse perfino la casalinga di Voghera e di Chiaromonte se ne sono rese conto con la vicenda Gambirasio-Bossetti).

La seconda cosa da chiedersi è CHI manovra il grande gioco mondiale sulle banche dati del  DNA, 

La terza cosa da chiedersi è CHI e DOVE si producono i vari kit, i vari reattivi, le varie apparecchiature.

La quarta cosa da chiedersi è CHI decide gli standard operativi...se la comunità scientifica o, come sembra (e stigmatizzato dagli Universitari Inglesi) l'apparato "militare" e  a quale nazione appartenga l'apparato "militare"-pilota che stabilisce sempre più materiali e metodi  organizzando gruppi di lavoro in tutto il mondo..a cui poi distribuisce istruzioni, manuali, kit, reattivi .. detta standard ecc..

La quinta cosa da chiedersi è se ciascuno di noi, con gli strumenti che ha a disposizione nel web, possa rendersi conto o meno che la questione è enorme e va molto oltre  il singolo criminal-case. A questo posso rispondervi senza tema di dubbio: SI.
Perciò documentatevi! Questo post, come quello sul database degli articoli sulla vicenda Gambirasio-Bossetti che troverete qui
è in continuo aggiornamento. E' una ricerca personale e basta.



Home • About Us • Laboratory Services • Biometric Analysis • CODIS • Planned Process and Timeline for Implementation of Additional CODIS Core Loci


 L'EVIDENZA DAL DNA PUO' ESSERE

 FABBRICATA!!

http://www.nytimes.com/2009/08/18/science/18dna.html?_r=0


INTANTO E' SPARITA DAL WEB E DALLA PAGINA DELLA NUCLEIX IL DOCUMENTO CHE IO PREVEDENDO.,,,,,...AVEVO SALVATO  e andate a farvi fottere!Questo:
Authentication of forensic DNA samples Dan Frumkin a, *, Adam Wasserstrom a, *, Ariane Davidson a , Arnon Grafit b aNucleix Ltd., 27 Habarzel St., Tel Aviv 69710, Israel b Serious Crime Unit Mobile Lab., Division of Identification & Forensic Science, Israel Police, Israel

* Corresponding authors. Tel.: +972 3 768 4935; fax: +972 3 768 4945. E-mail addresses: dan@nucleix.com (D. Frumkin), adam@nucleix.com (A. Wasserstrom).

Nel corso degli ultimi 20 anni, l'analisi del DNA ha rivoluzionato la scienza forense, ed è diventato un
strumento dominante in applicazione della legge. Oggi, la prova del DNA è la chiave per la condanna o l'esonero di sospettati di vari tipi di reati, dal furto di stupro e omicidio. Tuttavia, la possibilità disturbante
che la prova del DNA può essere falsificato è stato trascurato. Si scopre che la biologia molecolare di serie
tecniche come la PCR, clonazione molecolare, e recentemente ha sviluppato tutta la amplificazione del genoma (WGA), permettere a chiunque con attrezzature di base e know-how per la produzione di quantità praticamente illimitata di in vitro  sintetizzato (artificiale) di DNA con ogni profilo genetico desiderato. Questo DNA artificiale può quindi essere applicato a superfici degli oggetti o incorporati in veri e propri tessuti umani e piantati in scene del crimine. Qui noi mostrano che la procedura forense corrente non riesce a distinguere tali campioni di sangue, saliva, e superfici toccate con DNA artificiale, e campioni corrispondenti con in vivo generato (naturale) del DNA.
Inoltre, la genotipizzazione di entrambi i campioni artificiali e naturali con Profiler Plus1 prodotto profili completi senza anomalie. Al fine di contrastare efficacemente tale problema, abbiamo sviluppato un saggio di autenticazione, che distingue tra DNA naturale e artificiale basata sull'analisi metilazione di un insieme di
loci genomico: nel DNA naturale, alcuni loci sono metilato e altri sono non metilato, mentre in artificiale DNA tutti i loci sono non-metilati. Il dosaggio è stato testato su campioni naturali e artificiali di sangue, saliva, e toccato superfici, con pieno successo.
L'adozione di un test di autenticazione per i campioni casework come parte della procedura forense è necessaria per mantenere l'elevata credibilità di prova del DNA nel  sistema giudiziario.
PE 2009 Elsevier Ireland Ltd. Tutti i diritti riservati

1. Introduzione
La procedura legale corrente che si occupa di prova del DNA inizia sulla scena del crimine in cui i campioni biologici come il sangue e le macchie di saliva sono rilevati, definire, documentare, raccolti, e trasferito al laboratorio forense. In laboratorio, DNA è estratto e quantificato, di solito mediante real time PCR amplificazione il locus hTERT (Quantifiler1) o obiettivi simili [1]. Seguente quantificazione, circa 1 ng del DNA viene utilizzato per un profiling reazione, in cui 9-15 altamente polimorfici tandem repeat breve (STR) loci e il sesso tipizzazione marcatore amelogenina sono genotipizzazione. I loci sono di solito scelti da un insieme standard di loci fondamentali come loci 13 DNA combinata Index System (CODIS). Una dettagliata
descrizione della procedura forense è fornito in S1 testo.Il profilo del DNA di ogni persona è considerata unica (eccetto per i gemelli identici) [2], e, di conseguenza, questo '' impronta digitale del DNA '' è utilizzato in indagini di polizia per collegare tra una scena del crimine e uno specifico individuo, che è sia un sospetto nel caso, o identificato da una ricerca automatica del database (ad esempio CODIS). in anni recenti, Prova del DNA è diventata la '' gold standard '' di prove forensi, ed è uno strumento prezioso per la comunità della giustizia penale [3-7].
L'elevata credibilità della prova del DNA in tribunale nasce dal fatto che utilizza un approccio statistico basato sulla genetica delle popolazioni e verifica empirica [8], a differenza di altri tipi di forense prove, come ad esempio la balistica, analisi del sangue spruzzi e fibre analisi, che si basano su un parere esperto e hanno limitato collegamento alla scienza stabilita [7]. Si è anche considerato più affidabile testimonianze oculari, che è noto a soffrire da un tasso relativamente elevato di errori [8].

L'uso del DNA recuperato sulla scena del crimine come prova in tribunale si basa sul presupposto implicito che il DNA è genuine- provenienti da materiale biologico naturale. Tuttavia, come abbiamo mostrare qui, questa ipotesi potrebbe non essere necessariamente vero: DNA con qualsiasi profilo genetico desiderata può essere facilmente sintetizzato in vitro utilizzando comune [9,10], e recentemente sviluppato [11,12] biologico tecniche, integrati in veri e propri tessuti umani o applicate a superfici degli oggetti, e poi piantati in scene del crimine. quando il Procedura forense corrente viene applicata a oggetti o tessuti umani che contengono DNA sintetizzato, non riesce a riconoscere l'artificiale provenienza del campione, e il profilo risultante è indistinguibile da un profilo del DNA genuino.

Tuttavia, abbiamo dimostrato che i campioni naturali e artificiali possono essere differenziati basate su modelli  basati sulla differente metilazione . La metilazione è una modificazione epigenetica chimica del DNA, che si verifica nei mammiferi  sotto forma di un gruppo metilico (-CH3) che viene aggiunto enzimaticamente  alla posizione C5 della citosina in alcuni dinucleotidi CpG [13].
La metilazione del DNA si pensa inibisca l'espressione genica in cellule  animali, probabilmente influenzando la struttura della cromatina [14]. Nel genoma umano il 70-80% di tutti i CPGs sono metilati, mentre i CPGs non metilati sono raggruppati in gruppi chiamati '' isole CpG ''[15].

2. Materiali e metodi

2.1. Collezione di tessuti biologici

I campioni di sangue, macchie di saliva asciugare su carta assorbente, pelle raschiatura, capelli, e mozziconi di sigarette fumate sono stati raccolti da volontari. Il consenso informato è stato ottenuto da tutti i partecipanti reclutati nello studio. DNA da questi campioni è stato estratto e quantificati come descritto nella Sezione 2.6.

2.2. Biblioteca allele CODIS
Per la costruzione della libreria, singoli alleli di CODIS Segnalazioni di operazioni sospette e il locus hTERT sono stati amplificati dal DNA pool (Control DNA genomico umano del kit GenomePlex WGA2, Sigma-Aldrich) di reazioni PCR separati (primer e condizioni come descritto nella Sezione 2.9). Frammenti amplificati sono stati purificati  (kit di purificazione PCR QIAquick, QIAGEN), e clonato in il vettore pGEM-T-Easy (Promega). DNA plasmidico è stato purificato mediante il kit QIAprep Spin Miniprep (QIAGEN) e quantificata (NanoDrop 1000, Thermo Scientific). Per la genotipizzazione di clonato alleli, è stata utilizzata la (Promega) Kit PowerPlex16. La Genotipizzazione è stata eseguita in un alto filtraggio (throughput) simultaneamente genotipizzando 10-15 cloni (provenienti da diversi loci CODIS) in un'unica Reazione PowerPlex16. Nella libreria risultante ciascun elemento è una provetta  con migliaia di miliardi di copie di un singolo allele (ad esempio, un elemento è allele 11 del locus D8S1179, mentre un altro è allele 12 di D8S1179, e allo stesso modo per le altre CODIS loci). Notiamo che 1 fg del plasmide nella biblioteca contiene circa 160 copie del suo allele clonato; lo stesso numero di copie che  è presente a circa  1 ng di un genoma aploide.


2.3. Nella sintesi del DNA in vitro
il DNA artificiale è stato sintetizzato da una delle seguenti metodi:
PCR: Per il campione il cui profilo è mostrato in Fig. 1, i  10 loci inclusi nel kit Profiler Plus1 (Applied Biosystems) erano amplificati separatamente da 1 ng di DNA estratto da un mozzicone di  sigaretta affumicato da 'N400' (condizioni di PCR sono stati come descritto nella Sezione 2.9; sequenze primer sono in S3 testo). Frammenti individuali  amplificati   sono stati purificati (QIAquick PCR purificazione
Kit, QIAGEN), quantificati (NanoDrop 1000, Thermo Scientific), diluiti circa un milione di volte (a seconda della concentrazione dell'amplicone specifico), e combinati in una singola provetta.
Per il campione il cui profilo è mostrato in Fig. 2,
 1 ng di DNA 'N222' (Estratto da una macchia saliva su carta assorbente) è stato usato come modello in una singola reazione di PCR utilizzando il  mix primer Profiler Plus1.  Una diluizione 1: 1000 di reazione PCR è stata  utilizzata nella generazione del campione artificiale.
WGA:  l’intera amplificazione  genomica  è stata  realizzata da un multiplo spostamento di  amplificazione [16] con il Repli-g Midi Kit (QIAGEN) utilizzando 10 ng di DNA naturale come modello.

Assemblaggio dalla libreria degli alleli CODIS: Per il montaggio di profili utilizzando
la biblioteca degli alleli CODIS, uguali quantità di alleli (clonati in plasmidi) nel profilo desiderato, sono stati prelevati dalla libreria e combinati in un unico tubo.

2.4. Generazione di campioni forensi finti
Per generare campioni  di DNA artificiali, il DNA  sintetizzato in vitro è stato applicato direttamente sulla superficie dell'oggetto e lasciato asciugare. Per la generazione di campioni di sangue artificiale,  eritrociti sono stati isolati dal sangue intero mediante centrifugazione (1500 g, 10 min), e mescolati con DNA sintetizzato  in vitro sintetizzato.

figura 1. Profili di in vivo- e nel DNA sintetizzato vitro sono indistinguibili. (A) del profilo di DNA naturale ottenuto dalla saliva del donatore femminile 'N400'. (B-D) profili artificiali
di 'N400' ottenuto da DNA che è stato sintetizzato in vitro in tre diversi metodi: PCR (B), WGA (C), e montaggio da una libreria di alleli CODIS clonati (D). (E) artificiale
profilo di 'maschio-N400', che è identico al profilo di 'N400' affatto loci, tranne per il locus Amelogenin. Questo profilo è stato creato con l'aggiunta di un allele Y clonato (indicato da
freccia) alla miscela utilizzata per generare il profilo in (D). In A-E sono raffigurati profili parziali; profili completi sono forniti in S2 testo.



figura 2. I campioni forensi Mock con DNA artificiale. (A) Pistola con PCR amplificato DNA con il profilo di 'N222' applicato alla superficie esterna della sua azione. (B) passamontagna con saliva artificiale applicata alla sua superficie interna. La saliva artificiale conteneva un estratto di saliva naturale 'N270' (senza DNA) e frammenti di DNA con il profilo di 'maschio N400 'assemblato dalla libreria allele CODIS. (C) macchie di sangue artificiale contenente globuli rossi del sangue naturale di 'N227' e DNA artificiale 'N283' generato da WGA. In A-C, cerchi gialli raffigurano le zone da cui sono stati prelevati campioni per l'analisi. (D) I profili dei tre campioni artificiali. Tutti e tre i profili hanno ricevuto un 'perfetto' 'GeneMapper' ID-X il punteggio, e sono identici ai genotipi di DNA artificiale che è stato utilizzato per la loro produzione. Nessuna traccia di DNA estratto dalla saliva e globuli rossi sono visibili in i profili dal passamontagna e macchie di sangue (vedi E e F). (E) del profilo di donatore 'N270', il cui estratto di saliva è stato utilizzato per la fabbricazione del campione di passamontagna. (F) Profilo di donatore 'N227', le cui cellule rosse del sangue  sono state utilizzate  per la fabbricazione del campione della macchia di sangue. In D-F sono raffigurati i profili parziali; profili completi sono forniti in S2 testo.

Le cellule rosse del sangue mescolare al DNA sono state gocciolate da un'altezza di 1 m e lasciate asciugare. Per la generazione di campioni di saliva artificiale,  si è usato centrifugato di saliva (senza cellule)  da saliva naturale  (1500 g, 10 min), e mescolato   in vitro al  DNA sintetizzato. Il mix di saliva e DNA ottenuto  è stato applicato direttamente alla superficie dell'oggetto e lasciato asciugare. Una dettagliata Descrizione di tutti i campioni è fornito in testo S4.


2.5. Identificazione e raccolta di campioni forensi finti

Macchie sono stati identificati come il sangue umano con il ESAGONO Kit OBTI (BLUESTAR), e la saliva usando il test Phadebas1 amilasi (Phadebas). Campioni di sangue e tocco DNA sono stati raccolti con un tampone di cotone sterile, inumidito con acqua distillata. Campioni di saliva erano composti di cut-out porzioni del tessuto passamontagna intorno l'orifizio bocca.

2.6. Estrazione del DNA e quantificazione

Estrazione del DNA da tutti i campioni è stata eseguita secondo un protocollo di estrazione organica [17]. Quantificazione del DNA era eseguita utilizzando la quantificazione del DNA umano Quantifiler1 Kit (Applied Biosystems). Tempo reale PCR è stata eseguita su un sistema StepOneTM (Applied Biosystems).

2.7. Profilo del DNA, elettroforesi capillare e analisi del segnale STR loci sono stati amplificati con il Profiler Plus1 (Applied Biosistemi) e PowerPlex16 (per preparare l'allele CODIS libreria; Promega) kit con un GeneAmp1 PCR 9700 (Applied Biosistemi). I prodotti di amplificazione sono stati eseguiti su un ABI 310 Genetic Analyzer (Applied Biosystems) secondo il produttore istruzioni. Gli elettroferogrammi risultanti sono stati analizzati usando  Software GeneMapper ID-X di analisi (Applied Biosystems).


2.8. Conversione bisolfito e analisi di metilazione
Conversione bisolfito è stata effettuata con il kit EpiTectTM (Qiagen). Fabbricato DNA è stato amplificato mediante PCR sul set di loci utilizzato per l'autenticazione. In ciascuna PCR, 1/10 della EpiTectTM prodotti sono stati utilizzati come template e la reazione è stata eseguita come descritto nella Sezione 2.9. Frammenti amplificati sono stati purificati utilizzando il kit di purificazione PCR QIAquick (Qiagen) e sequenziali

2.9. PCR
Tutte le  PCR non profiling  sono state eseguite in un volume totale di 50 ml con 0,2 mm ciascuno di primer, 0,2 mm ogni dNTP, 5 U AmpliTaq Gold (Applied Biosystems), e 5 ml 10 PCR Buffer contenente 15 MgCl2 mm (Applied Biosystems). L’ amplificazione è  stata eseguita in un GeneAmp1 PCR 9700 (Applied Biosystems).  Il programma PCR  utilizzato è stato: 95 8C per 11 min, seguiti da 35 cicli di 94 8C per 1 min, 59 8C per 1 min, 72 8C per 1 min e seguita da una finale estensione passo di 60 8C per 45 min.
Le PCR per profilatura reazioni sono state eseguite secondo le istruzioni del produttore (Con 28 cicli).


2.10. Probabilità di '' profilo 'inesistente'
La probabilità che un maschio estraneo casuale ha Profiler Plus1 profilo di 'uomo-N400' (un profilo identico a quello di 'N400' con l'eccezione del locus Amelogenin, in cui il suo genotipo è XY invece di XX) è stato calcolato sulla base di frequenze alleliche in la popolazione degli Stati Uniti caucasica [18]. Questa probabilità è stata moltiplicata  del 3,5  per 10 alla nona (Popolazione maschile approssimativo) a dare l’approssimata probabilità che esiste una persona con il 'N400 maschili' profilo (esclusi i parenti stretti di 'N400').

2.11. Miscele di DNA
Miscele di DNA sono state create combinando DNA naturale 'N217' (Estratto da sangue con il kit DNA FlexiGene, QIAGEN) con il DNA artificiale 'N226'  (amplificato dalla kit Repli-g Midi, QIAGEN da  DNA estratto per estrazione organico da un singolo capello).

3. Risultati

3.1. Profili di in vivo- e nel DNA in vitro per sintesi sono indistinguibile. Per dimostrare che il DNA può essere sintetizzato in vitro tale che il suo profilo non sarà diverso da quello del DNA in vivo originale, abbiamo profilato un campione di DNA naturale e confrontato a corrispondenti profili di DNA sintetizzato in vitro con tre diversi metodi. DNA naturale è stato estratto da un saliva  campione di donatore femminile 'N400' e genotipizzati utilizzando il Profiler Plus1 e GeneMapper ID-X (Applied Biosystems); (Fig. 1A). Il scheda tecnica ottenuto dalla saliva del donatore 'N400' era perfetto, come indicato dalle barre verdi  al di sopra di tutti i  loci.
Avanti, abbiamo prodotto il DNA artificiale con lo stesso genotipo  di 'N400' utilizzando tre diversi tipi di sintesi in vitro 









figura 3. Schema del saggio di autenticazione del DNA. Il saggio accetta come ingresso DNA che è stato estratto dal campione forense in questione e uscite se il DNA è
autentico (in vivo generata) o non-autentico (in vitro sintetizzato)

PCR
(Fig. 1B), WGA (Fig. 1C), e la clonazione molecolare (Fig. 1D). Il genotipi di tutto in vitro campioni sintetizzati 'N400' erano perfetti secondo GeneMapper analisi ID-X e identico al genotipo di DNA naturale 'N400'. DNA Modello per la PCR è stato di 1 ng di DNA estratto da un mozzicone di sigaretta fumata da 'N400', e il modello per WGA era di 10 ng di DNA 'N400' estratto da una secca macchia saliva su carta assorbente. Il campione creato da molecolare la clonazione non ha richiesto alcun DNA 'N400' come modello (solo a priori conoscenza del suo profilo) ed è stato assemblato utilizzando il '' CODIS biblioteca allele '' che abbiamo creato in precedenza.

 La libreria è composta da una serie di alleli singoli CODIS clonato in plasmidi, e può essere utilizzato per generare diversi profili desiderati assemblaggio di loro alleli costituenti. Al fine di dimostrare la possibilità di creare qualsiasi profilo desiderato da un tale libreria, abbiamo anche montato un profilo di una persona inesistente, che chiamiamo 'N400 maschio'. Questo profilo è identica a quella di 'N400', con l'eccezione del Amelogenin locus, in cui il suo genotipo è XY anziché XX (Fig. 1E). Noi calcolato che la probabilità che un maschio estraneo a 'N400' ha un profilo identico a quello di 'N400 maschio' è 7.95 10ÿ12, e di conseguenza la probabilità che non esiste nel mondo popolazione un maschio estraneo con un profilo identico è maggiore del 99,99%.

3.2. La procedura legale corrente non riesce a distinguere tra  la prova del DNA naturale e artificiale

3.2.1. Generazione di prova del DNA artificiale

Abbiamo creato 10 campioni forensi finte con il DNA artificiale, di tipi che possono essere trovati in scene del crimine, e sottoposto per tre di questi campioni per analisi attraverso la procedura forense completo (Il resto dei campioni sono discussi nella sezione 3.4). Questi tre campioni contenevano DNA artificiale che è stato sintetizzato con diversi metodi: un campione di pistola con il DNA PCR amplificato, un passamontagna con saliva contenente frammenti di DNA dal CODIS allele biblioteca, e macchie di sangue che contengono  DNA sintetizzati dal WGA
(Figura 2A-C;. Vedi descrizione dettagliata in testo S4).


3.2.2. Analisi delle prove del DNA artificiale
I tre campioni sono stati trattati secondo la routine procedura legale eseguita in scene del crimine. I campioni erano raccolto dalla superficie esterna dell'azione pistola, dal tessuto passamontagna, e dalle macchie di sangue. Una porzione della passamontagna campione è stato testato per la presenza di saliva usando l'Phadebas1 test, ed i risultati sono stati positivi (dati non mostrati), a causa della presenza di amilasi nel supernatante della saliva naturale estrarre. Una parte del campione macchia di sangue è stato testato per la presenza di DNA del sangue umano con il test ESAGONO OBTI, e i  risultati sono stati positivi (dati non mostrati), per la presenza di emoglobina nei globuli rossi. Il DNA è stato estratto dal campioni e profilata (Fig. 2D). I genotipi di tutti e tre i campioni erano identici ai genotipi del DNA artificiale che è stata utilizzata nella loro produzione ('N222', 'maschio N400', e 'N283', rispettivamente). Inoltre, nei campioni di sangue e saliva artificiale c'erano nessuna traccia osservabili di DNA naturale dalla saliva e il sangue donatori (Fig. 2E e F), e tutti i profili artificiali ricevuto un perfetto GeneMapper ID-X punteggio, in linea con un solo collaboratore.


3.2.3. Analisi indipendenti di tracce di sangue artificiale
Al fine di verificare se i risultati ottenuti nel nostro profilazione
laboratorio erano dipendenti dalla nostra messa a punto specifica, abbiamo inviato una
duplicare tampone del campione di sangue artificiale per un forense leader
DNA laboratorio per l'analisi. Le procedure impiegate per questo
laboratorio sono stati convalidati secondo le norme stabilite
dal gruppo di lavoro scientifico per i metodi di analisi del DNA
(SWGDAM) e adottati come standard federali degli Stati Uniti. DNA era
estratto dal campione in laboratorio utilizzando il DNA EZ1
Investigator Kit (QIAGEN), e quantificati tramite un vero e proprio proprietario
time PCR (sia di estrazione e quantificazione metodi erano
diverso da quelli impiegati nel nostro laboratorio). Genotipizzazione era
eseguito con Profiler Plus1 e COfiler1 (Applied Biosystems).
Il rapporto ha ricevuto dagli stati di laboratorio che '' Il DNA
scheda tecnica ottenuto dal campione 2S09-002-001 [il sangue artificiale
tampone] è coerente con un collaboratore di sesso maschile '', e la profilazione
risultati erano identici al genotipo del DNA artificiale del donatore
'N283', con '' No Edits '' (cioè si trovano in una qualsiasi delle anomalie
analizzato loci; vedi report in formato testo S5).
Questi risultati dimostrano che il DNA artificiale può essere facilmente
applicato su superfici di oggetti o incorporati in autentico umano
tessuti, creando in tal modo prove forensi artificiale che, dopo
subendo l'intera procedura casework forense, produce perfetto
profili.
3.3. Descrizione del test di autenticazione DNA
Abbiamo sviluppato un saggio di autenticazione in grado di differenziare
tra naturale e tutti i tipi di DNA artificiale. Il saggio è
sulla base del fatto che, a differenza vitro DNA sintetizzato in cui è
completamente non metilato, in vivo generato DNA contiene loci che
sono completamente e coerentemente denaturato e altri loci che sono
completamente e coerentemente unmethylated. Uno schema del test
è presentato in Fig. 3. DNA da un campione forense in questione è
trattato con bisolfito di sodio, che converte tutto metilato
citosine a uracils, lasciando le cytosines metilato
inalterato [19]. Dopo la conversione bisolfito, il DNA è
amplificato mediante PCR a una serie di loci, contenente una CODIS riferimento
locus (FGAref), e quattro non CODIS loci (NT18, ADD6, MS53,
SW14; Testo S6). L'insieme dei loci è costituito da alta complessità, non ripetitive
Sequenze di DNA (FGAref consiste nel non ripetitiva
parte del locus FGA). Sono stati scelti perché NT18 e ADD6
sono costantemente metilato, mentre MS53 e SW14 sono costantemente
non metilato in tessuti umani quali sangue, saliva e
epidermide (la fonte del tatto DNA). Per aumentare l'affidabilità
del dosaggio, i primer per questi loci sono stati progettati per amplificare
con uguale efficienza sia del DNA convertito e non convertito, quindi
consentendo il rilevamento di conversione bisolfito incompleta. Seguente
PCR, la presenza o l'assenza di ampliconi è determinato dalla
elettroforesi (in alternativa, real time PCR può essere utilizzato).
Totale assenza di amplificati (compresi FGAref) indica un
problema nella procedura a causa di inibitori della PCR, insufficienti
template, ecc amplificazione successo di FGAref con concomitante
fallimento di amplificazione del non-CODIS loci indicano che il DNA
è artificiale ed è stato sintetizzato da uno dei metodi che
generare solo un sottoinsieme di loci genomici (ad esempio, la PCR o la clonazione di CODIS
loci). Amplificazione di successo di tutti i loci indica che il DNA
contiene una rappresentazione completa del genoma ed è sia naturale
DNA o DNA artificiale sintetizzato da WGA. Differenziazione
tra questi due tipi di DNA è ottenuta sequenziando il
quattro ampliconi non CODIS e analizzando la loro metilazione
modello. Il DNA è determinata essere di origine in vivo se
modello di metilazione è coerente con quella in vivo generata
DNA (metilazione cioè completa di tutti CPGs in NT18 e ADD6
insieme con assoluta non metilazione di tutti CPGs in MS53 e
SW14), altrimenti è determinato ad essere di origine in vitro.


3.4. Dimostrazione del test di autenticazione DNA
Abbiamo applicato il test di autenticazione DNA per 20 deridere forense
campioni, 10 con il DNA naturale, 10 con il DNA artificiale (tre di
questi campioni sono stati descritti nella sezione 3.2), e un negativo
campione di controllo senza DNA (descrizione dettagliata nel testo S4). Tutti
campioni con DNA naturale hanno dimostrato con successo l'amplificazione di tutti
loci, e l'amplicone FGAref era presente in tutti i campioni, sia
naturale e artificiale (Fig. 4).

 I campioni che 13,14,16,17,19,20
contengono DNA artificiale sintetizzato mediante PCR o clonazione molecolare,
fallito per amplificare loci quattro non CODIS, poiché il DNA in questi
Campioni contiene solo loci CODIS. Questi campioni sono stati quindi
determinata per essere non autentici e non sono stati elaborati ulteriormente.
I rimanenti campioni di DNA artificiali (11,12,15,18) contenuti
DNA WGA-sintetizzato e in questi campioni tutti loci amplificato
successo, simile al DNA naturale.
I campioni di DNA naturale e WGA di sintesi sono stati elaborati
ulteriormente sequenziando quattro loci non CODIS e analizzare la
stato di metilazione in tutte le posizioni CpG (Tabella 1).





100_6032.JPG


figura 4. Amplificazione Prodotti in Campioni forensi finto naturali e artificiali. Aliquote di Prodotti di PCR have been analizzati su un gel di agarosio al 2%. Il locus FGAref E amplificato in Tutta
Campioni (SIA naturali Che artificiali), ma non nel Campione di Controllo negativo. Loci non CODIS vengono amplificati in tutto naturale (1-10) e in WGA Basata su Campioni artificiali
(11,12,15,18), ma Sono assenti in PCR-e Campioni artificiali a base di clonazione, (13,14,16,17,20).

4. Discussione


4.1. Produrre prova del DNA artificiale richiede solo attrezzature di base e il know-how

Abbiamo dimostrato la facilità con cui il DNA artificiale prova può  essere prodotto, e che tale prova '' passa'' le  legali correnti procedure come autentiche. Il fatto che un forense indipendente laboratorio che fornisce servizi a Stati Uniti le forze dell'ordine, ha analizzato il nostro campione di sangue artificiale ottenendo un perfettamente normale, singolo collaboratore DNA profilo-attesta il problema .
In questo caso il DNA artificiale è stato progettato per avere il profilo di donatore 'N283', ed è stato amplificato da una quantità minima di DNA estratto da un singolo capello di questo donatore. Allo stesso modo, abbiamo prodotto campioni artificiali di DNA amplificati da un mozzicone di sigaretta e una secca macchia saliva su carta assorbente. Tali oggetti di uso quotidiano, che possono essere utilizzate per ottenere DNA fonte per la produzione artificiale campioni, possono essere ottenuti da praticamente chiunque. Anche questo vincolo viene rimosso quando si considera la possibilità di produrre prova artificiale utilizzando la '' biblioteca allele CODIS '', dal momento che qualsiasi profilo può essere montato senza la necessità di DNA di origine, richiede solo conoscenza del profilo desiderato.

Una libreria contenente 425 cloni corrispondenti a tutti gli alleli CODIS noti (compresi tutte le  microvarianti rare) è sufficiente per generare qualsiasi profilo desiderato, mentre un’ altra piccola libreria è sufficiente per generare i profili della vasta maggioranza della popolazione umana.
Una volta  che si è ottenuto dalla  fonte il  DNA di una persona o di  un suo conoscente, si ottiene il suo profilo  e  la produzione effettiva del campione è artificiale semplice e diretto.


a). numero di posizioni CpG metilati su numero complessivo di incarichi CpG in ogni locus. Nessun amplificatore. = Nessun amplicone osservato; grassetto indica i risultati in contrasto con il DNA di
origine vivo. b) '' Nessuna decisione '' viene emesso quando non c'è l'amplificazione in nessuno dei loci. Le possibili ragioni possono essere insufficienti / degradato DNA template, inibitori della PCR, etc.


Generazione di grandi quantità di  DNA artificiale  può essere eseguita durante la notte, utilizzando attrezzature di laboratorio di base e kit commerciali, richiede solo una conoscenza di base biologia molecolare, e poco gli oneri finanziari. Vi è un numero crescente di persone con le competenze necessarie e
accesso alle apparecchiature necessarie, come ad esempio gli scienziati, la ricerca studenti, tecnici di laboratorio negli ospedali, farmaceutica e aziende per le biotecnologie, ecc Queste persone potrebbero produrre DNA artificiale e usarlo maliziosamente per  se stessi, o trasferirlo ad altre persone non hanno la capacità di produrre il DNA.



figura 5. analisi di metilazione campioni naturali e artificiali. Sequenze parziali di DNA da campioni di sangue naturali e artificiali (campioni 2 e 11, rispettivamente) a non CODIS loci (dinucleotidi CpG sono sottolineate). Le sequenze di DNA non convertito sono identiche a tutti loci, dimostrando che i campioni naturali e artificiali non possono essere distinte sulla base della sequenza di solo. A seguito di conversione bisolfito, il modello di metilazione differenziale vs naturale DNA artificiale è esposto: DNA naturale è metilato a NT18 e ADD6, e metilato a MS53 e SW14, mentre il DNA artificiale è metilato in tutti e quattro i loci.


Inoltre, poiché i servizi di biologia molecolare commerciali stanno diventando molto diffusi
e DNA con ogni sequenza può essere ordinato on-line,  la  fabbricazione un campione di DNA artificiale non richiede molto più di un personal computer e collegamento a Internet.

4.2. L'autenticazione è necessaria  per evitare false corrispondenze con il  DNA. Sono registrati I profili del DNA di milioni di persone banche dati nazionali a rapida crescita , e la tendenza attuale di tutto il
mondo è di includere sempre più profili in loro, non solo di condannati colpevoli, ma anche di arrestati.

Profili da attività operative

i campioni sono regolarmente cercati contro questi database (ad esempio, software byautomatic come CODIS), e quando viene trovato un profilo identico, un Dna '' partita '' è fatto, rendendo la persona identificata un sospetto nel caso e di solito porta al suo arresto [ 20]. In alcune giurisdizioni, la prova del DNA da solo può portare alla condanna, senza la necessità di alcuna prova corroborante [21]. Tuttavia, anche quando gli elementi di prova sia richiesto dalla legge, non c'è dubbio che la presenza di prova del DNA da una scena del crimine nei confronti di un imputato di lui / lei pone in una posizione terribile. La combinazione tra la facilità con cui i campioni di DNA artificiale può essere prodotto, con il fatto che un profilo del DNA registrato trovato sul luogo del delitto porterà automaticamente ad un database '' partita '', e il peso della prova del DNA in aula, crea una situazione problematica che riteniamo dovrebbe essere affrontata dalla comunità forense con l'adozione di un test del DNA di autenticazione per i campioni casework. DNA artificiale con profilo registrata può anche essere prodotto, e in tal caso non si tradurrà in una partita. Tuttavia, questo prova del DNA artificiale potrebbe ostacolare le indagini e l'autenticazione di questo DNA potrebbe aiutare nella messa a fuoco l'indagine di indicazioni rilevanti.

4.3. SNP approcci di profilatura basato sono anche suscettibili di fabbricazione recente, le alternative a str profilazione basato sono stati proposti, in primo luogo singolo nucleotide polimorfismo (SNP) approcci basati [22], che può essere vantaggioso su STR profilazione [23-25]. Simile alla profilazione basato STR, approcci basati SNP sono anche suscettibili di fabbricazione con i metodi qui descritti. Anche se sono da utilizzare un gran numero di SNP in profilatura, questo non affrontare efficacemente il problema della fabbricazione basato WGA, poiché WGA produce una rappresentazione completa del genoma, e quindi si prevede di produrre un perfetto '' SNP profilo ''.

4.4. L'integrazione di autenticazione DNA nel procedimento forense Il test qui descritto impiega sequenziamento bisolfito, una procedura che è relativamente alta intensità di lavoro, in termini di tempo, e che richiedono competenze specifiche, e quindi può essere più adatto come un servizio fornito da laboratori dedicati alla comunità forense. Tuttavia, al fine di ridurre i costi ei possibili ritardi, e di ridurre i rischi di errori legati alla allungamento della catena di custodia, può essere vantaggioso sviluppare un test di autenticazione DNA integrato che verrà eseguita in laboratori forensi esistenti, come parte la procedura forense regolare. La questione dell'integrazione dell'autenticazione DNA nel procedimento forense ha anche aspetti giuridici, e quindi speriamo che questo lavoro sarà invocare una discussione di carattere giuridico, così come negli ambienti scientifici.

4.5. Miscele di DNA prova del DNA artificiale può contenere '' DNA artificiale 'puro' o una miscela di DNA artificiale e naturale. Ad esempio, una tale miscela può contenere DNA artificiale incorporato o applicato su tessuti veri dalla vittima (ad esempio, sangue, unghie). Come abbiamo dimostrato, i campioni possono essere autenticati miscela nello stesso modo dei campioni di origine singoli, e il DNA artificiale viene rilevato anche quando si tratta di un componente minore della miscela. Il software automatico utilizzato per il sequenziamento assegna un nucleotide in una certa posizione, quando il modello è puro o contiene un componente importante, e le uscite 'N' quando c'è ambiguità. Pertanto, il DNA artificiale può essere rilevato in campioni automaticamente quando è il componente principale, utilizzando il software sequencing esistente. Tuttavia, l'interpretazione di miscele in cui il DNA artificiale è un componente minore è più complesso e può richiedere lo sviluppo di orientamenti, simili a quelle che sono state proposte per la profilatura [26].

4.6. Altri approcci per Analisi autenticazione DNA di metilazione rappresenta soltanto uno dei vari possibili approcci che possono essere utilizzati per l'autenticazione DNA. Metodi alternativi possono essere basati su analisi dei prodotti di balbuzie, pregiudizi rappresentazione, distribuzione delle dimensioni frammento di DNA, e la presenza di sequenze genomiche non. Prodotti balbettare sono artefatti causati da slittamento della DNA polimerasi in sequenze ripetute [27]. Su profiling, DNA artificiale che è stato pre-amplificato mediante PCR subisce più cicli di amplificazione di DNA naturale (preamplificazione comprende anche diversi cicli di PCR) e perché un maggior numero di cicli è associata a livelli elevati di balbuzie [28], come DNA pre-amplificato può essere distinto dal DNA naturale da percentuali più elevate balbettare. Polarizzazione rappresentazione si riferisce a differenze nel numero di copie tra i diversi loci genomici che sono una conseguenza intrinseca della amplificazione in vitro di DNA [11]. Dal momento che questo pregiudizio potrebbe non essere necessariamente evidente nel piccolo insieme di CODIS loci utilizzato per la profilazione, può essere necessario analizzare una serie più ampia di loci. L'analisi della distribuzione delle dimensioni dei frammenti può anche rivelare l'origine del DNA: in DNA naturale, la distribuzione ha un pattern stereotipati atteso (che è funzione del metodo di estrazione utilizzato e il grado di degrado), diverso dai modelli osservati in vari tipi di DNA sintetizzati in vitro. Sequenze non genomiche quali dimeri di primer, sequenze plasmidi, linker oligonucleotidi artificiali, ecc, non dovrebbero essere trovati nel DNA naturale (con la possibile eccezione delle sequenze batteriche), ma si prevede che si trovano in vari tipi di in vitro DNA sintetizzato. 5. Conclusioni In questo lavoro si affronta la possibilità inquietante che la prova del DNA può essere falsificato e piantato in scene del crimine, e l'attuale incapacità del procedimento legale di rilevare tali elementi di prova artificiale. Presentiamo una soluzione a questo problema nella forma di un saggio di autenticazione DNA in grado di distinguere tra la prova del DNA naturale e artificiale. Per preservare la credibilità delle prove DNA in aula, se c'è una preoccupazione per la possibile autenticità delle prove DNA, un approccio come qui presentata può essere adottata per verificare la presenza di DNA artificiale.


Ringraziamenti


Ringraziamo Howard Cedar per le sue intuizioni su analisi methyaltion, Eran Eldar per l'estrazione del sangue esecuzione, Shira Grafit per un aiuto con le figure, e Avraham Levy, Yuval Dor, Yaakov Benenson, Eliahu Wasserstrom, Elon Ganor, e Meirav Chovav per la revisione critica di questo manoscritto.
Appendix A. Supplementary data Supplementary data associated with this article can be found, in the online version, at doi:10.1016/j.fsigen.2009.06.009.



RIFERIMENTI  [1] J.M. Butler, Forensic DNA Typing. Biology, Technology and Genetics of STR Markers, 2nd ed., Elsevier Academic Press, Burlington, 2005. [2] A.J. Jeffreys, V. Wilson, S.L. Thein, Individual-specific ‘fingerprints’ of human DNA, Nature 316 (1985) 76–79. [3] M.A. Jobling, P. Gill, Encoded evidence: DNA in forensic analysis, Nat. Rev. Genet. 5 (2004) 739–751. [4] N. Morling, Forensic genetics, Lancet 364 (Suppl. 1) (2004) s10–s11. [5] P. Reilly, Legal and public policy issues in DNA forensics, Nat. Rev. Genet. 2 (2001) 313–317. [6] A. Opar, Crime and punishment, Nat. Med. 12 (2006) 1110–1111. [7] M. Lynch, God’s signature: DNA profiling, the new gold standard in forensic science, Endeavor 27 (2003) 93–97. [8] M.J. Saks, J.J. Koehler, The coming paradigm shift in forensic identification science, Science 309 (2005) 892–895. [9] D. Stirling, J.M.S. Bartlett (Eds.), PCR Protocols (Methods in Molecular Biology), 2nd edition, Humana Press, New Jersey, 2003. [10] J. Sambrook, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York, 2001. [11] R.S. Lasken, M. Egholm, Whole genome amplification: abundant supplies of DNA from precious samples or clinical specimens, Trends Biotechnol. 21 (2003) 531–535. [12] S. Panelli, G. Damiani, L. Espen, G. Micheli, V. Sgaramella, Towards the analysis of the genomes of single cells: further characterisation of the multiple displacement amplification, Gene 372 (2006) 1–7. [13] T.B. Miranda, P.A. Jones, DNA methylation: the nuts and bolts of repression, J. Cell Physiol. 213 (2007) 384–390. [14] T. Hashimshony, J. Zhang, I. Keshet, M. Bustin, H. Cedar, The role of DNA methylation in setting up chromatin structure during development, Nat. Genet. 34 (2003) 187–192. [15] A. Bird, DNA methylation patterns and epigenetic memory, Genes Dev. 16 (2002) 6–21. [16] F.B. Dean, S. Hosono, L. Fang, X. Wu, A.F. Faruqi, P. Bray-Ward, Z. Sun, Q. Zong, Y. Du, J. Du, M. Driscoll, W. Song, S.F. Kingsmore, M. Egholm, R.S. Lasken, Comprehensive human genome amplification using multiple displacement amplification, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99 (2002) 5261–5266. [17] E.F. Fritsch, T. Maniatis, J. Sambrook, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York, 1989. [18] J.M. Butler, R. Schoske, P.M. Valone, J.W. Redman, M.C. Kline, Allele frequencies for 15 autosomal STR loci on U.S. Caucasian, African American, and Hispanic populations, J. Forensic Sci. 48 (2003) 908–911. [19] M. Frommer, L.E. McDonald, D.S. Millar, C.M. Collis, F. Watt, G.W. Grigg, P.L. Molloy, C.L. Paul, A genomic sequencing protocol that yields a positive display of 5-methylcytosine residues in individual DNA strands, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89 (1992) 1827–1831. [20] J.W. Bond, C. Hammond, The value of DNA material recovered from crime scenes, J. Forensic Sci. 53 (2008) 797–801. [21] M. Levitt, Forensic databases: benefits and ethical and social costs, Br. Med. Bull. 83 (2007) 235–248. [22] B. Sobrino, M. Brion, A. Carracedo, SNPs in forensic genetics: a review on SNP typing methodologies, Forensic Sci. Int. 154 (2005) 181–194. [23] J.M. Butler, M.D. Coble, P.M. Vallone, STRs vs. SNPs: thoughts on the future of forensic DNA testing, Forensic Sci. Med. Pathol. 3 (2007) 200–205. [24] K. Babol-Pokora, J. Berent, SNP-minisequencing as an excellent tool for analysing degraded DNA recovered from archival tissues, Acta Biochim. Pol. 55 (2008) 815– 819. [25] H. Nakahara, N. Hosono, T. Kitayama, K. Sekiguchi, M. Kubo, A. Takahashi, Y. Nakamura, Y. Yamano, K. Kai, Automated SNPs typing system based on the invader assay, Leg. Med. 11 (2009) S111–S114. [26] P. Gill, C.H. Brenner, J.S. Buckleton, A. Carracedo, M. Krawczak, W.R. Mayr, N. Morling, M. Prinz, P.M. Schneider, B.S. Weir, DNA commission of the International Society of Forensic Genetics: recommendations on the interpretation of mixtures, Forensic Sci. Int. 160 (2006) 90–101. [27] D. Shinde, Y. Lai, F. Sun, N. Arnheim, Taq DNA polymerase slippage mutation rates measured by PCR and quasi-likelihood analysis: (CA/GT)n and (A/T)n microsatellites, Nucleic Acids Res. 31 (2003) 974–980. [28] L. Forster, J. Thomson, S. Kutranov, Direct comparison of post-28-cycle PCR purification and modified capillary electrophoresis methods with the 34-cycle ‘‘low copy number’’ (LCN) method for analysis of trace forensic DNA samples, Forensic Sci. Int. Genet. 2 (2008) 318–328.

Planned Process and Timeline for Implementation 
of Additional CODIS Core Loci


Coinciding with the revision of the FBI Director’s Quality Assurance Standards and an 
examination of the procedures for operation  of the National DNA Index System, 
the FBI Laboratory empanelled a CODIS Core Loci Working Group in May 2010 
to evaluate the necessity for additional loci. Almost 12 years earlier, the FBI’s 
original STR Standardization Project had recommended the 13 CODIS core loci 
equired and still being used for DNA data uploaded to NDIS. Despite the different
 environments in which the original STR Project and the current Working Group 
were and are operating, both recognized the importance of balancing the privacy 
issues attendant to storing genetic information with ensuring the effectiveness 
of CODIS to assist criminal investigations. Among its first tasks, the current 
Working Group recommended criteria for acceptance of any new CODIS loci, 
including no known association to medical condition or defects (refers to whether 
or not the loci is diagnostic of any known medical condition or disease status.).1

In a Letter to the Editor of Forensic Science International Genetics announcing the 
proposed additional loci under consideration for CODIS, the Working Group identified 
the following three factors in support of expanding the current CODIS core loci: 
1) facilitates greater discrimination, 

2) assists in missing person investigations, and 
3) encourages international data sharing efforts by having more loci in common with 
other countries for comparison purposes.2 

The Chair of the Working Group  updated the DNA community on the selection 
of the potential additional CODIS Core Loci at the 22nd International Symposium 
on Human Identification, the 15th- 17th National CODIS Conferences, 
the European  Network of Forensic Science Institutes’ 2011 DNA Working Group 
meetings,  
and the 2011 semiannual meetings of the Scientific Working Group 
on DNA Analysis Methods (SWGDAM). 
As the Working Group addresses the validation and then implementation 
phases of the project, the attached process and timeline for determination 
of additional CODIS core loci were developed to keep the community
 apprised of the Group’s progress and provide an outline for what remains 
to be accomplished. 

The Working Group has continued discussions with STR kit manufacturers 
(subject to non-disclosure agreements) on the development of STR kits 
that incorporate some or all of these proposed loci. Additionally, 
the Working Group has identified the following statutory 
and operational requirements for adding new loci: 
  • The Federal DNA Identification Act of 1994 [42 U.S.C. §14132], 
  • requires compliance with the quality assurance standards issued by the FBI Director. 
  • The “Quality Assurance Standards for Forensic DNA Testing 
  • and DNA Databasing Laboratories” define the minimum requirements for validation.
  • The Justice for All Act [Pub. Law 108-405 §203(f)] requires that the Department
  •  of Justice provide Congress with notice of the proposed use of new core markers 
  • 180 days in advance of any such implementation.
  • Operational Procedures for the National DNA Index System (NDIS) also 
  • contain minimum criteria for approval of additional loci or kits that will be
  •  acceptable at NDIS, such as concordant studies, mixed samples, 
  • non-probative samples, population studies, and precision studies. 



  1. Process for Determination of Additional CODIS Core Loci  


Selection of Laboratories to Participate in Validation Studies 
  • Based upon recommendations from the CODIS Core Loci Working Group, t
  • he FBI will select laboratories representative of the forensic DNA community
  •  (i.e., casework, database, missing person, instrument platforms, kits, etc.), 
  • to participate in a validation project for the proposed CODIS core loci 
  • using criteria derived from the Quality Assurance Standards and NDIS Procedures.

    • Participating laboratories will be responsible for:
      • Management approval of participation agreement
      • Dedicated personnel for the length of the project
      • Instruments required for the validation
      • Samples for analysis
    • The FBI will be responsible for:
      • Costs of the STR kits used by participating laboratories
      • Definition and coordination of validation experiments, 
      • data evaluation and assessment
Validation of Proposed Additional CODIS Core Loci 
  • Congress will be notified of the proposed additional CODIS core loci.
  • Participating laboratories will conduct validation experiments/studies 
  • in accordance with the Quality Assurance Standards.
  • Successful validation efforts will be dependent on as yet undetermined factors, such as:
    • Ability of kit manufacturers to make robust versions of kits available for purchase
    • Ability to include additional loci within existing 5-dye chemistry
    • Ability to configure existing instruments to run 6-dye chemistry
    • Separate validation tracks for casework and known database samples
    • Availability of federal funding
  • Compilation, review, and evaluation of validation results
  • Feedback to kit manufacturers and incorporation of any resulting changes 
  • to kits in the validation plan
  • Publication or posting of the validation results
  • Ongoing progress reports to DNA community and other stakeholders
Selection of CODIS Core Loci 
  • Input will be obtained from and progress reports 
  • will be provided to the DNA community and other stakeholders, 
  • Assessment and selection of new CODIS core loci will be performed.
Implementation of New CODIS Core Loci into NDIS Operations 
  • §  The DNA community will be involved in review and development 
  • of the following:
    • Ongoing progress reports
    • Sufficient lead time necessary for implementation
    • Searching Strategies
    • Match Strategies
    • Confirmation Strategies
  • §  Congress will be notified of the new CODIS core loci 
  • required for upload and searching at NDIS.

Timeline for Determination of Additional CODIS Core Loci 






Gli insulti  eventuali ("Basaglia, minchiate,  neurologia, chemtrails, gomblotti" ecc ecc,  
da parte di  micro-Cip  o  di micro-Ciop   e scoiattolini  vari o roditori umani e disumani, 
tornati  nell'isola delle ghiande, rimasti nel continente o extracontinentali), sono liberi, 
come sempre... TANTO IO ME NE STRAFOTTO! Le riflessioni e le correlazioni  
fanno parte del libero arbitrio


Ci sono vari gruppi di lavoro nel mondo per l'applicazione 
del protocollo dell'FBI. 
Anche in Europa ne abbiamo


DA FIRENZE(ISt.Meyer) l'adozione del protocollo dell'FBI
http://www.pubfacts.com/detail/12808722/Identification-of-forensic-

L'ENFSI  è il network europeo  per gli Istituti di Scienze Forensi, qui gli Stati

sebbene digitando "Cattaneo Cristina" non compaia nulla di specifico, tuttavia il motore di ricerca
aggrega questo nome a Betty Gatliff  nel workshop sulla ricostruzione di sculture facciali (Antropologia Forense)


A questo link troverete cose molto interessanti, 

anche se la traduzione è fatta sommariamente da Google

chi è nel campo, capisce.



questo è il file originale in Inglese


a proposito di profili misti, 
le raccomandazioni dell'ENFSI
da pagina 14..stesso link di cui sopra 

poi c'è IL LAVAGGIO DEL CERVELLO 

DA PARTE DELLE TV!!!

http://translate.google.it/translate?hl=it&sl=en&u=http://www.criminaljusticedegreesguide.com/features/10
-forensic-myths-spread-by-tv.html&prev=search

SEMPRE TRADUZIONE APPROSSIMATIVA GOOGLE MA ..SI CAPISCE! 
10 MITI DA  SFATARE!
  1. La prova del DNA avvolge tutti i casi


    Lo vedete in quasi tutti gli episodi di qualunque versione di CSI vi capita di essere a guardare. La squadra trova la prova del DNA, lo infila in un programma di computer, e minuti più tardi, appare un sospetto, insieme con la sua fedina penale completo e indirizzo attuale. Come ci sono casi irrisolti là fuori con la tecnologia magico come questo? La verità è che, mentre la prova del DNA è un ottimo strumento per la polizia e gli avvocati, non è infallibile e non è una garanzia che il caso sarà risolto. Il sistema che molti spettacoli usano per abbinare il loro DNA è CODIS, un vero e proprio DNA Staff Archivio profilo. Il numero di profili DNA in CODIS è aumentato in modo significativo negli ultimi 10 anni, ma ci sono ancora meno di 9 milioni di profili reo nel sistema a partire dal 2010, considerando che ci sono circa 313 milioni di persone negli Stati Uniti, non è difficile immaginare che non ogni campione di DNA trovata coincide con qualcuno in archivio.



Gli analisti forensi mai commettere errori

  1. Mentre il mercato dell'intrattenimento è diventato inondato di forensi spettacoli, la persona media diventa sempre più familiarità con quello che pensano è il vero e proprio processo di giustizia. Sembra banale che i pubblici ministeri avrebbero mucchi di prove forensi inconfutabili per convincere i giurati di colpevolezza di un sospetto. Questa idea, nota come "CSI Effect", è in realtà colpisce le prove reali . Giurie si aspettano di essere dato uno spettacolo e prove concrete come hanno visto in tv, e quando non capisco, che spesso non pensano il caso è abbastanza forte. D'altra estremità del "CSIEffect" è la nozione che gli analisti forensi sono infallibili. Giurie ritengono i risultati dei test di questi analisti, anche se è stato dimostrato più e più volte che molti test possono essere viziati

Forensics laboratori sono ad alta tecnologia e fornita di tutte le attrezzature necessarie

  1. Spettacoli Crime danno l'impressione che ogni dipartimento di polizia ha un proprio laboratorio forense. La polizia, medici legali, e gli analisti sembrano tutti di essere ospitato nello stesso edificio, quando in realtà, forensics laboratori servono spesso centinaia di città e di campagna dipartimenti di polizia. New Hampshire, per esempio, ha un laboratorio che serve l'intero stato. Non solo questi laboratori pochi e lontani tra loro, ma sono anche non sofisticato, spazioso e ben attrezzate, come si vede in TV.Laboratori in tutta la nazione sono sottofinanziati e sotto organico, e non troverete ogni pezzo di attrezzatura necessaria in nessuno di essi.







Questo documento sulla gestione del Data base, in seno all'ENFSI 
è stato finanziato dalla Comunità Europea 

da questo articolo si evince una conflittualità tra comunità  scientifica  
ed apparato  diciamo "militare"
http://www.bbc.com/news/science-environment-15311718

il Prof. Bruce è diventato una voce coraggiosa per rigore scientifico in genetica forense.
"Abbiamo visto alcune pratiche forensi adottate troppo in fretta, col risultato in
 tragici sprechi di tempo prezioso indagini, azioni penali illecite, e più vittime", ha detto.

di questo articolo, la traduzione automatica che, anche se
approssimativa...si capisce

Piani di aggiornamento banca dati del DNA del FBI sono sotto il fuoco


















Tampone del DNA
Un tampone guancia fornisce il DNA necessario per il test

Un importante aggiornamento del Federal Bureau of (FBI) sistema di database del DNA 
di indagine è venuto sotto il fuoco da parte dei membri della comunità scientifica forense.
Il sistema Codis viene utilizzato per generare i profili genetici memorizzati nel database 
nazionale del DNA US.
L'FBI vuole espandere il numero di marcatori genetici utilizzati da Codis per classificare i singoli profili di DNA.
Ma un ex capo di scienza presso l'ufficio dice che il piano non è stato guidato da 
esigenze  degli scienziati.
Il dottor Bruce Budowle, insieme con i colleghi Arthur Eisenberg e Jianye Ge, 
ha delineato le obiezioni al Promega 22 ° Simposio Internazionale sulla Human
 Identificazione   (ISHI) nel Maryland, Stati Uniti.
Un altro scienziato ha detto alla BBC News i cambiamenti sono stati di vitale importanza
 perché sarebbero posare
 come sono stati registrati i profili del DNA negli Stati Uniti 
forse per "i prossimi 20 anni".
Mentre lavorava presso l'FBI nel 1990, il dottor Budowle ha 
aiutato scegliere i marcatori genetici attualmente utilizzati da Codis .

Divario Consultazione

Dice che la revisione è una buona idea, ma che la scelta i marcatori giusti per 
casework forense è cruciale.
















Ha detto a BBC News che il FBI non ha sufficientemente consultarsi con 
la comunità scientifica forense prima di fare le sue raccomandazioni.

"La prima volta abbiamo preso un approccio a livello comunitario - 
21 laboratori rimboccarsi le maniche e la generazione di dati abbiamo potuto 
analizzare e [l'uso di] prendere decisioni", ha spiegato il dottor Budowle, 
presso la University of North Texas Health Science Center a Fort Worth .
"Questa volta, hanno formato un gruppo di lavoro di circa cinque [scienziati] 
e una persona FBI per decidere che cosa il nucleo dovrebbe essere.
"Se le esigenze di Codis - nostro sistema di banca dati nazionale - 
guidare i processi casework, o qualora le esigenze delle attività operative 
guidare processi CODIS?
"Mi auguro il secondo è ovviamente quello che dovrebbe essere fatto."

alto profilo

La banca dati nazionale degli Stati Uniti - la più grande al mondo - contiene attualmente circa 10 milioni di profili di autori di reati e ha assistito a più di 141.000 indagini.
CODIS (che sta per Combined DNA Index System) utilizza un set di 13 marcatori genetici - noto come il "loci core" - per generare singoli profili di DNA.

















FBI sigillo
Database Codis dell'FBI è il più grande  del mondo
Nel maggio 2010, l'FBI ha istituito una sei-forte gruppo di lavoro per rivedere i loci 

di base utilizzati per ricerche nelle banche dati. Ora ha raccomandato l'attuale 
serie di 13 indicatori essere aumentato a 24.
L'importanza di tali marcatori è stata dimostrata nel caso di un uomo britannico 
arrestato nel 1999. Il suo profilo DNA corrispondente  raccolto in un furto
 rispetto alle sei loci genetici.
Il sospetto trascorso diversi mesi in prigione prima che il suo avvocato ha chiesto un nuovo test 10-marcatore. Il sospetto differiva dal sospetto furto con scasso in uno dei quattro marcatori addizionali e fu liberato.
Mentre le probabilità di tali incontri casuali tra individui non imparentati sono relativamente piccoli, aumentano come banche dati del DNA crescere in dimensioni.
Inoltre, alcuni marcatori genetici sono migliori per alcuni compiti rispetto ad altri, ha detto il dottor Budowle, che ha evidenziato quello che ha detto sono state incongruenze nel processo di selezione per i loci nucleo.
Dott Budowle ha detto che alcuni dei marcatori utilizzati nei nuovi e vecchi schemi CODIS compreso tali grandi frammenti di DNA che può essere difficile per gli scienziati forensi per rilevare in scena del crimine del DNA - che può essere soggetto a degrado, o possono essere presenti solo in piccole importi.
Anche se i grandi marcatori frammento sono informativi, il dottor Budowle ha detto, "se hai degradato campioni e non farlo, è inutile".
Ha poi aggiunto: "Gli analisti [in mio laboratorio] vengono da me tutto il tempo con casi difficili Dicono di quelli grandi frammento:.. 'Sbarazzarsi di loro perché non danno risultati" "
Egli ha anche detto che il nuovo schema passò marcatori informativi sul cromosoma Y (maschile), che sarebbe utile per la ricerca familiare - una tecnica utilizzata quando gli scienziati non riescono a trovare una corrispondenza esatta per un campione in un database del DNA.
Ricerca familiare si basa invece sulla ricerca di vicino, ma non perfetto, corrisponde a quello potrebbe rappresentare parenti stretti di un sospetto.

Difficoltà Loci

Un portavoce del laboratorio dell'FBI ha rifiutato di commentare direttamente sulla presentazione del Dott Budowle.
Tuttavia, il dottor Douglas R Lepri, dal laboratorio dell'FBI di Quantico, in Virginia, che presiede il gruppo di lavoro di espansione Codis, recentemente ha illustrato le raccomandazioni dell'Ufficio di presidenza sulla rivista Forensic Science Internazionale: Genetics .

















medico legale
Marcatori genetici devono essere scelti con cura a seconda del compito in mano

Le modifiche hanno lo scopo di aumentare la potenza di discriminare tra profili individuali
 e di ridurre la probabilità di incontri casuali.
L'ufficio di presidenza vuole anche aumentare la compatibilità con i database internazionali
 per consentire la condivisione delle informazioni transfrontaliero - di crescente importanza 
nella lotta al terrorismo.
Il dottor Lepri ha detto che il gruppo di lavoro aveva fissato i criteri oggettivi per l'accettazione
 di eventuali nuovi marcatori, e aveva consultato con i produttori di kit di analisi del DNA.
Tuttavia, il dottor Budowle esortato l'FBI per effettuare ulteriori ricerche sulle prestazioni di 
diversi marcatori in indagini forensi ultimi prima di stabilirsi su una nuova serie.
Ha spiegato: "Se facciamo i compiti a casa e il dati supporta che questi erano i 
migliori marcatori [], che è grande Se non lo supporta e venire con una migliore serie 
di marcatori, che è altrettanto grande..
"Reach out, ottenere un sacco di punti di vista, parlare con persone che hanno un 
sacco di esperienza. Non limitatevi."
Il dottor Greg Hampikian, uno specialista forense del DNA da Boise State University, 
ha detto alla BBC News: "Bruce ha sollevato specifiche, le questioni scientifiche 
sostanziali circa la scelta del nuovo loci.
"Il suo punto non è che questi sono male, ma ce ne sono di migliori disponibili -.
 In particolare, quelli con più potere di capire la differenza tra gli individui, e più probabilità 
di rilevazione in campioni degradati (in quanto avrebbero rilevare pezzi più piccoli o DNA)"

Dr Hampikian anche sostenuto l'inclusione di informative marcatori del cromosoma Y,
 in particolare nei casi di rapporti familiari e aggressioni sessuali. Marcatori del cromosoma Y
 devono essere analizzati separatamente allo stato attuale, e ha detto che questo potrebbe 
comportare critica tempo perso nelle indagini.

Bruce è diventato una voce coraggiosa per rigore scientifico in genetica forense.
Abbiamo visto alcune pratiche forensi adottate troppo in fretta, e quelli risultato in
 tragiche sprechi di tempo prezioso indagini, azioni penali illeciti, e più vittime", ha detto.


Una sfida simile a quella affrontata da parte dell'FBI telai per custodi della banca dati del DNA 
nazionale del Regno Unito (NDAD), che detiene circa 4m profili.
Il NDAD attualmente utilizza 10 loci di base per generare profili; ma il professor 
Sir Alec Jeffreys, che ha contribuito a pioniere profilo del DNA, ha raccomandato 
il numero è aumentato a 15 o 16.
Alcuni ricercatori sono preoccupati per l'assenza di un calendario per l'aggiornamento 
del NDAD, e che, senza di essa, il Regno Unito rischia di cadere ben indietro rispetto 
al resto d'Europa.
ENFSI European Network of Forensic Science Institute


VARIE PUBBLICAZIONI SCIENTIFICHE




NELLO STUDIO: PORTOGALLO, SPAGNA, BRASILE, CINA ecc ecc


DA FIRENZE(ISt.Meyer) l'adozione del protocollo dell'FBI


Intanto   il dibattito è aperto circa l'affidabilità della scienza
forense, dei suoi criteri, dei suoi metodi
NON E' ORO TUTTO QUELLO CHE LUCCICA


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https://www.youtube.com/watch?v=YU_FzQFk-hQ lL Prof.Frumkin di Tel Aviv, Responsabile dalla Nucleix, illustra i metodi per distinguere il DNA autentico da quello creato in laboratorio. Il brevetto è della Nucleix. Adesso che viene fuori SUI MERDIA la storia delle manipolazioni SUI VIDEO e FINALMENTE si parla delle anomalie DEL DNA di ignoto 1 nella cui stessa traccia è presente il solo nucleare di Ignoto 1, il mitocondriale di Yara e il mitocondriale di un altro soggetto non identificato.. E QUINDI, ADESSO CHE SI PAVENTA LA POSSIBILITà DI UN Dna falso....ECCO CHE SCOMPAIONO LE PAGINE DETERMINANTI PER IDENTIFICARLO!!!???? Avete toppato. Tempo fa, avevo salvato tutto ed inviato i documenti a Salvagni, comprensivi dell'indirizzo dei due ricercatori ed i contatti con la NUCLEIX! CON QUESTO COMPORTAMENTO ABBIAMO CAPITO che dovremo procurarci il kit per determinare il DNA sintetico!!!https://www.youtube.com/watch?v=YU_FzQFk-hQ

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